Кальцеїн, також відомий як флуорексон, флуоресцеїновий комплекс, являє собою флуоресцентний барвник з довжинами хвиль збудження та випромінювання 495 та 515 нм, відповідно, і має вигляд помаранчевих кристалів. Кальцеін самогаситься при концентраціях вище 70 мМ і зазвичай використовується як індикатор витоку ліпідів везикул. Він також традиційно використовується як комплексометричний індикатор для титрування іонів кальцію з ЕДТА та для флуорометричного визначення кальцію.
Застосування
Нефлуоресцуючий ацетометокс-дериват кальцеіну (кальцеін AM, АМ = ацетометил) використовується в біології, через свою здатність проникати через клітинну мембрану в живі клітини, що робить його корисним для тестування клітин на життєздатність і для короткочасного нанесення мітки на клітини. В якості альтернативи можуть бути використані Fura-2, Furaptra, Indo-1 та . Ацетометокси-група приховує ту частину молекули, яка хелатує іони Са2+, Mg2+, Zn2+ та інших. Після транспортування в клітини внутрішньоклітинні естерази видаляють ацетометоксигрупу, молекула потрапляє всередину і дає сильну зелену флуоресценцію. Оскільки мертвим клітинам не вистачає активних естераз, маркуються лише живі клітини . Підрахунок проводиться за допомогою проточної цитометрії.
Зараз кальцеїн рідко використовується як індикатор Ca2+ або Mg2+, оскільки його флуоресценція чутлива до цих іонів лише при сильно лужному pH, і, отже, він не особливо корисний для вимірювання Ca2+ або Mg2+ у клітинах. При фізіологічному pH флуоресценцію кальцеїну потужно гасять Co2+, Ni2+ і Cu2+ і помітно Fe3+ і Mn2+. Ця реакція загасання флуоресценції може бути використана для виявлення відкриття тимчасової пори мітохондріальної проникності (mPTP) та для вимірювання змін об'єму клітини. Кальцеїн зазвичай використовується для детекції клітин та для вивчення ендоцитозу, міграції та контактів між клітинами.
Ацетоксиметиловий ефір кальцеїну також використовується для виявлення взаємодій ліків з білками мультирезистентності (АВС-транспортери) в інтактних клітинах, оскільки він є чудовим субстратом транспортера мультирезистентності 1 (MDR1) P-глікопротеїну та білка, асоційованого з мультирезистентністю (MRP1). Кальцеїн АМ-тестування може бути використане як модель для вивчення взаємодії ліків, для скринінгу субстратів транспортера та/або його інгібіторів; а також для визначення in vitro резистентності клітин до ліків, зокрема і зразків пацієнтів.
Кальцеїн також використовується для маркування щойно вилупленої риби та для маркування кісток у живих тварин.
Список літератури
- Allen, T.M.; Cleland, L.G. (1980). Serum-induced leakage of liposome contents. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 597 (2): 418—426. doi:10.1016/0005-2736(80)90118-2. PMID 7370258.
- Sendai virus induced leakage of liposomes containing gangliosides Yung Shyeng Tsao and Leaf Huang Biochemistry 1985 24 (5), 1092-1098
- Patel, H.; Tscheka, C.; Heerklotz, H. (2009). Characterizing vesicle leakage by fluorescence lifetime measurements. Soft Matter. 5 (15): 2849—2851. Bibcode:2009SMat....5.2849P. doi:10.1039/B908524F.
- How Light Microscopes Work. HowStuffWorks. Архів оригіналу за 24 вересня 2015. Процитовано 4 грудня 2020.
- Hamann, J.F.; Kiilgard; Litman, T.; Alvarez-Leefmans, J.; Zeuthen, T. (2002). Measurement of cell volume changes by fluorescence self-quenching. J. Fluorescence. 12 (2): 139—145. doi:10.1023/a:1016832027325.
- Fluorescent Indicators for Zn2+ and Other Metal Ions—Section 19.7. Molecular Probes: The Handbook. invitrogen. Архів оригіналу за 24 квітня 2011. Процитовано 4 грудня 2020.
- Glavinas H, Krajcsi P, Cserepes J, Sarkadi B (January 2004). The role of ABC transporters in drug resistance, metabolism and toxicity. Curr Drug Deliv. 1 (1): 27—42. doi:10.2174/1567201043480036. PMID 16305368. Архів оригіналу за 19 липня 2012.
- Karászi E, Jakab K, Homolya L та ін. (February 2001). Calcein assay for multidrug resistance reliably predicts therapy response and survival rate in acute myeloid leukaemia. Br. J. Haematol. 112 (2): 308—14. doi:10.1046/j.1365-2141.2001.02554.x. PMID 11167823.
- Marking fry using calcein. Game & Wildlife Conservation Trust. Архів оригіналу за 25 вересня 2006.
Вікіпедія, Українська, Україна, книга, книги, бібліотека, стаття, читати, завантажити, безкоштовно, безкоштовно завантажити, mp3, відео, mp4, 3gp, jpg, jpeg, gif, png, малюнок, музика, пісня, фільм, книга, гра, ігри, мобільний, телефон, android, ios, apple, мобільний телефон, samsung, iphone, xiomi, xiaomi, redmi, honor, oppo, nokia, sonya, mi, ПК, web, Інтернет
Nemaye perevirenih versij ciyeyi storinki jmovirno yiyi she ne pereviryali na vidpovidnist pravilam proektu Kalceyin takozh vidomij yak fluorekson fluoresceyinovij kompleks yavlyaye soboyu fluorescentnij barvnik z dovzhinami hvil zbudzhennya ta viprominyuvannya 495 ta 515 nm vidpovidno i maye viglyad pomaranchevih kristaliv Kalcein samogasitsya pri koncentraciyah vishe 70 mM i zazvichaj vikoristovuyetsya yak indikator vitoku lipidiv vezikul Vin takozh tradicijno vikoristovuyetsya yak kompleksometrichnij indikator dlya titruvannya ioniv kalciyu z EDTA ta dlya fluorometrichnogo viznachennya kalciyu ZastosuvannyaPislya togo yak kalceyin AM potraplyaye v klitinu vin peretvoryuyetsya esterazami v kalceyin nizhche Vin zdatnij zv yazuvati ioni kalciyu sho prizvodit do zelenoyi fluorescenciyi Oskilki lishe zhivi klitini mayut dostatnyu kilkist esteraz tilki voni fluoresciruyut zelenim kolorom pislya zbudzhennya Nefluorescuyuchij acetometoks derivat kalceinu kalcein AM AM acetometil vikoristovuyetsya v biologiyi cherez svoyu zdatnist pronikati cherez klitinnu membranu v zhivi klitini sho robit jogo korisnim dlya testuvannya klitin na zhittyezdatnist i dlya korotkochasnogo nanesennya mitki na klitini V yakosti alternativi mozhut buti vikoristani Fura 2 Furaptra Indo 1 ta Acetometoksi grupa prihovuye tu chastinu molekuli yaka helatuye ioni Sa2 Mg2 Zn2 ta inshih Pislya transportuvannya v klitini vnutrishnoklitinni esterazi vidalyayut acetometoksigrupu molekula potraplyaye vseredinu i daye silnu zelenu fluorescenciyu Oskilki mertvim klitinam ne vistachaye aktivnih esteraz markuyutsya lishe zhivi klitini Pidrahunok provoditsya za dopomogoyu protochnoyi citometriyi Shkirni fibroblasti lyudini u novonarodzhenih zabarvleni kalceyinom AM vizualizovani pid monohromatichnim mikroskopom psevdofarbuvannya Zaraz kalceyin ridko vikoristovuyetsya yak indikator Ca2 abo Mg2 oskilki jogo fluorescenciya chutliva do cih ioniv lishe pri silno luzhnomu pH i otzhe vin ne osoblivo korisnij dlya vimiryuvannya Ca2 abo Mg2 u klitinah Pri fiziologichnomu pH fluorescenciyu kalceyinu potuzhno gasyat Co2 Ni2 i Cu2 i pomitno Fe3 i Mn2 Cya reakciya zagasannya fluorescenciyi mozhe buti vikoristana dlya viyavlennya vidkrittya timchasovoyi pori mitohondrialnoyi proniknosti mPTP ta dlya vimiryuvannya zmin ob yemu klitini Kalceyin zazvichaj vikoristovuyetsya dlya detekciyi klitin ta dlya vivchennya endocitozu migraciyi ta kontaktiv mizh klitinami Acetoksimetilovij efir kalceyinu takozh vikoristovuyetsya dlya viyavlennya vzayemodij likiv z bilkami multirezistentnosti AVS transporteri v intaktnih klitinah oskilki vin ye chudovim substratom transportera multirezistentnosti 1 MDR1 P glikoproteyinu ta bilka asocijovanogo z multirezistentnistyu MRP1 Kalceyin AM testuvannya mozhe buti vikoristane yak model dlya vivchennya vzayemodiyi likiv dlya skriningu substrativ transportera ta abo jogo ingibitoriv a takozh dlya viznachennya in vitro rezistentnosti klitin do likiv zokrema i zrazkiv paciyentiv Kalceyin takozh vikoristovuyetsya dlya markuvannya shojno viluplenoyi ribi ta dlya markuvannya kistok u zhivih tvarin Spisok literaturiAllen T M Cleland L G 1980 Serum induced leakage of liposome contents Biochimica et Biophysica Acta BBA Biomembranes 597 2 418 426 doi 10 1016 0005 2736 80 90118 2 PMID 7370258 Sendai virus induced leakage of liposomes containing gangliosides Yung Shyeng Tsao and Leaf Huang Biochemistry 1985 24 5 1092 1098 Patel H Tscheka C Heerklotz H 2009 Characterizing vesicle leakage by fluorescence lifetime measurements Soft Matter 5 15 2849 2851 Bibcode 2009SMat 5 2849P doi 10 1039 B908524F How Light Microscopes Work HowStuffWorks Arhiv originalu za 24 veresnya 2015 Procitovano 4 grudnya 2020 Hamann J F Kiilgard Litman T Alvarez Leefmans J Zeuthen T 2002 Measurement of cell volume changes by fluorescence self quenching J Fluorescence 12 2 139 145 doi 10 1023 a 1016832027325 Fluorescent Indicators for Zn2 and Other Metal Ions Section 19 7 Molecular Probes The Handbook invitrogen Arhiv originalu za 24 kvitnya 2011 Procitovano 4 grudnya 2020 Glavinas H Krajcsi P Cserepes J Sarkadi B January 2004 The role of ABC transporters in drug resistance metabolism and toxicity Curr Drug Deliv 1 1 27 42 doi 10 2174 1567201043480036 PMID 16305368 Arhiv originalu za 19 lipnya 2012 Karaszi E Jakab K Homolya L ta in February 2001 Calcein assay for multidrug resistance reliably predicts therapy response and survival rate in acute myeloid leukaemia Br J Haematol 112 2 308 14 doi 10 1046 j 1365 2141 2001 02554 x PMID 11167823 Marking fry using calcein Game amp Wildlife Conservation Trust Arhiv originalu za 25 veresnya 2006