Azərbaycanca
Беларускі
Dansk
Deutsch
Española
Français
Indonesia
Italiana
日本語
Қазақ
Lietuvos
Nederlands
Português
Русский
සිංහල
แบบไทย
Türkçe
Українська
中國人
United State
Afrikaans
Фарбування за Романовським — Гімзою (нім. Giemsasche Lösung für die Romanowsky Färbung) — цитологічний метод фарбування мікроорганізмів, клітинних структур і різних тканин, включаючи кров, для вивчення методом оптичної мікроскопії. Запропоновано в 1904 році Густавом Гімзою. Гімза назвав барвник «Розчином Гімзи для забарвлення за Романовським». Забарвлює ацидофільні утворення в різні відтінки червоного кольору, базофільні — в кольори від пурпурового до синього.
Історія методу
Пріоритет використання фарби з метиленового синього й еозину для дослідження препаратів крові і паразитів крові належить Чеславу Івановичу Хенцинському — військовому лікарю і прозектору Одеської міської лікарні, який у 1889 році застосував для фарбування мазків крові та кров'яних паразитів метиленовий синій у поєднанні з еозином. Хенцинській спочатку використовував послідовне подвійне забарвлення насиченим водним розчином метиленового синього, розведеним наполовину дистильованою водою, і спиртовим розчином еозину (0,5 г еозину, 60 г етанолу і 40 г води). Згодом він став використовувати суміш рівних обсягів цих розчинів, фарбування наступало через 4—5 хв. У результаті виходило двоколірне забарвлення: еритроцити забарвлювалися в рожевий колір, малярійні плазмодії — у блакитний колір і були чітко видні на тлі еритроцитів. Також у блакитний колір зафарбовувалися ядра лейкоцитів.
Однак, двоколірне забарвлення не дозволяло виявляти особливості будови малярійних плазмодіїв, зокрема, не виявлялося ядро цього найпростішого, недостатньо добре виявлялися й особливості морфології клітин крові. Це спонукало Д. Л. Романовського модернізувати методику. Він частково змінив ситуацію, але іноді результати фарбування були нестійкі та непевні. Це змусило Гімзу експериментувати, допоки він не добився сталого результату в 1902 році знайшовши як необхідний стабілізатор гліцерин.
Методика виготовлення фарбника
Фарбувальну суміш Романовського — Гімзи у вигляді порошку (нині це комерційний барвник) розчиняють у суміші рівних обсягів метилового спирту (метанолу) і гліцерину (0,8 г барвника на 100 мл розчинника). Барвник розчиняється погано, тому його розтирають із розчинником у кількості 0,3 г на 100 мл, а потім, помішуючи, додають барвник до отримання потрібної концентрації. Приготування барвника часто займає кілька днів. Важливо як розчинники використовувати хімічно чисті метиловий спирт і гліцерин, оскільки домішки погіршують властивості барвника. Замість метилового спирту можна застосовувати й 100%-й етиловий спирт. Приготовану фарбувальну суміш зберігають у сухому прохолодному місці в щільно закритій посудині.
Гімза запропонував свого часу стійку фарбувальну суміш:
- Азур 1 — 3,772 г
- Еозин — 2,165 г
- Метиленовий синій — 1,563 г
- Метанол — 750,0 мл
- Гліцерин — 256,0 мл
Методика забарвлення
Мазки, фіксовані в метанолі, фарбують розчином (1 мл готової рідкої фарби Романовського — Гімзи + 2 мл основного буферного розчину + 47 мл дистильованої води) впродовж 40—120 хвилин. Тривалість фарбування підбирають емпірично. Користуються фосфатним буфером, але pH буфера залежить від виду мазка: для мазка кісткового мозку — 5,8—6,0, для мазка крові — 6,4—6,5, для виявлення найпростіших — 6,8, малярійних плазмодіїв — 7,0—7,2. Обполіскують у дистильованій воді, висушують і досліджують при імерсії.
Результати застосування методики при фарбуванні мікроорганізмів
Бактерії фарбуються у фіолетово-червоне забарвлення, цитоплазма клітин — у блакитний колір, ядра — в червоний. При фарбуванні найпростіших їхня цитоплазма набуває блакитного кольору, а ядра — червоно-фіолетового забарвлення.
Результати фарбування формених елементів крові
- цитоплазма лімфоцитів забарвлюється в синьо-блакитний відтінок, а їхні ядра — в кольори від інтенсивно пурпурного до фіолетового;
- цитоплазма моноцитів забарвлюється в мутний блакитно-сірий відтінок, тоді як їхні ядра — у світліший пурпурно-червоний, є ніжна азурофільна зернистість;
- гранули базофілів фарбуються інтенсивно синьо-фіолетово;
- гранули еозинофілів фарбуються оранжево-рожево;
- гранули нейтрофілів фарбуються в кольори від пурпурного до фіолетового;
- ядра лейкоцитів фіолетово-червоного забарвлення з добре видимою структурою хроматину; добре виділяються ядерця;
- грануломери тромбоцитів фарбуються в червоний колір, тоді як гіаломери — у блакитний;
- гемоглобін забарвлюється рожево.
Результат фарбування хромосом
Хромосоми забарвлюються рівномірно фарбником. Якщо був вплив на хромосоми трипсином, то вони демонструють ділянки різного кольору (хромосомні смуги).
Примітки
- Giemsa G. Eine Vereinfachung und Vervollkommnung meiner Methylenazur-Methylenblau-Eosin-Färbemethode zur Erzielung der Romanowsky-Nochtschen Chromatinfärbung. // Centralbl f Bakt etc: magazin. — 1904. — Bd. 37. — S. 308—311. (нім.)
Джерела
- B. Fleischer: 100 years ago: Giemsa's solution for staining of plasmodia. Trop Med Int Health. 9 (2004), 755—756. (англ.)
- К 120-й годовщине открытия эффекта Романовского. Окраска по Романовскому: к вопросу о приоритете. А. В. Безруков, ООО ЭМКО. 2010. [1] [ 27 листопада 2021 у Wayback Machine.] (рос.)
Посилання
- Giemsa-Färbung [ 12 червня 2018 у Wayback Machine.] (нім.)
| Вікісховище має мультимедійні дані за темою: Фарбування за Романовським — Гімзою |
Вікіпедія, Українська, Україна, книга, книги, бібліотека, стаття, читати, завантажити, безкоштовно, безкоштовно завантажити, mp3, відео, mp4, 3gp, jpg, jpeg, gif, png, малюнок, музика, пісня, фільм, книга, гра, ігри, мобільний, телефон, android, ios, apple, мобільний телефон, samsung, iphone, xiomi, xiaomi, redmi, honor, oppo, nokia, sonya, mi, ПК, web, Інтернет
Farbuvannya za Romanovskim Gimzoyu nim Giemsasche Losung fur die Romanowsky Farbung citologichnij metod farbuvannya mikroorganizmiv klitinnih struktur i riznih tkanin vklyuchayuchi krov dlya vivchennya metodom optichnoyi mikroskopiyi Zaproponovano v 1904 roci Gustavom Gimzoyu Gimza nazvav barvnik Rozchinom Gimzi dlya zabarvlennya za Romanovskim Zabarvlyuye acidofilni utvorennya v rizni vidtinki chervonogo koloru bazofilni v kolori vid purpurovogo do sinogo Istoriya metoduPrioritet vikoristannya farbi z metilenovogo sinogo j eozinu dlya doslidzhennya preparativ krovi i parazitiv krovi nalezhit Cheslavu Ivanovichu Hencinskomu vijskovomu likaryu i prozektoru Odeskoyi miskoyi likarni yakij u 1889 roci zastosuvav dlya farbuvannya mazkiv krovi ta krov yanih parazitiv metilenovij sinij u poyednanni z eozinom Hencinskij spochatku vikoristovuvav poslidovne podvijne zabarvlennya nasichenim vodnim rozchinom metilenovogo sinogo rozvedenim napolovinu distilovanoyu vodoyu i spirtovim rozchinom eozinu 0 5 g eozinu 60 g etanolu i 40 g vodi Zgodom vin stav vikoristovuvati sumish rivnih obsyagiv cih rozchiniv farbuvannya nastupalo cherez 4 5 hv U rezultati vihodilo dvokolirne zabarvlennya eritrociti zabarvlyuvalisya v rozhevij kolir malyarijni plazmodiyi u blakitnij kolir i buli chitko vidni na tli eritrocitiv Takozh u blakitnij kolir zafarbovuvalisya yadra lejkocitiv Odnak dvokolirne zabarvlennya ne dozvolyalo viyavlyati osoblivosti budovi malyarijnih plazmodiyiv zokrema ne viyavlyalosya yadro cogo najprostishogo nedostatno dobre viyavlyalisya j osoblivosti morfologiyi klitin krovi Ce sponukalo D L Romanovskogo modernizuvati metodiku Vin chastkovo zminiv situaciyu ale inodi rezultati farbuvannya buli nestijki ta nepevni Ce zmusilo Gimzu eksperimentuvati dopoki vin ne dobivsya stalogo rezultatu v 1902 roci znajshovshi yak neobhidnij stabilizator glicerin Metodika vigotovlennya farbnikaFarbuvalnu sumish Romanovskogo Gimzi u viglyadi poroshku nini ce komercijnij barvnik rozchinyayut u sumishi rivnih obsyagiv metilovogo spirtu metanolu i glicerinu 0 8 g barvnika na 100 ml rozchinnika Barvnik rozchinyayetsya pogano tomu jogo roztirayut iz rozchinnikom u kilkosti 0 3 g na 100 ml a potim pomishuyuchi dodayut barvnik do otrimannya potribnoyi koncentraciyi Prigotuvannya barvnika chasto zajmaye kilka dniv Vazhlivo yak rozchinniki vikoristovuvati himichno chisti metilovij spirt i glicerin oskilki domishki pogirshuyut vlastivosti barvnika Zamist metilovogo spirtu mozhna zastosovuvati j 100 j etilovij spirt Prigotovanu farbuvalnu sumish zberigayut u suhomu proholodnomu misci v shilno zakritij posudini Gimza zaproponuvav svogo chasu stijku farbuvalnu sumish Azur 1 3 772 g Eozin 2 165 g Metilenovij sinij 1 563 g Metanol 750 0 ml Glicerin 256 0 mlMetodika zabarvlennyaMazki fiksovani v metanoli farbuyut rozchinom 1 ml gotovoyi ridkoyi farbi Romanovskogo Gimzi 2 ml osnovnogo bufernogo rozchinu 47 ml distilovanoyi vodi vprodovzh 40 120 hvilin Trivalist farbuvannya pidbirayut empirichno Koristuyutsya fosfatnim buferom ale pH bufera zalezhit vid vidu mazka dlya mazka kistkovogo mozku 5 8 6 0 dlya mazka krovi 6 4 6 5 dlya viyavlennya najprostishih 6 8 malyarijnih plazmodiyiv 7 0 7 2 Obpoliskuyut u distilovanij vodi visushuyut i doslidzhuyut pri imersiyi Amastigoti Leishmania tropica yaki roztashovani v makrofagah Zbilshennya v 100 raziv farbuvannya za Romanovskim GimzoyuZbudnik tropichnoyi malyariyi Plasmodium falciparum vseredini eritrocita v stadiyi persnya Farbuvannya za Romanovskim GimzoyuRezultati zastosuvannya metodiki pri farbuvanni mikroorganizmivBakteriyi farbuyutsya u fioletovo chervone zabarvlennya citoplazma klitin u blakitnij kolir yadra v chervonij Pri farbuvanni najprostishih yihnya citoplazma nabuvaye blakitnogo koloru a yadra chervono fioletovogo zabarvlennya Zbudniki babeziozu v preparati krovi pri farbuvanni za Romanovskim Gimzoyu Rezultati farbuvannya formenih elementiv krovicitoplazma limfocitiv zabarvlyuyetsya v sino blakitnij vidtinok a yihni yadra v kolori vid intensivno purpurnogo do fioletovogo citoplazma monocitiv zabarvlyuyetsya v mutnij blakitno sirij vidtinok todi yak yihni yadra u svitlishij purpurno chervonij ye nizhna azurofilna zernistist granuli bazofiliv farbuyutsya intensivno sino fioletovo granuli eozinofiliv farbuyutsya oranzhevo rozhevo granuli nejtrofiliv farbuyutsya v kolori vid purpurnogo do fioletovogo yadra lejkocitiv fioletovo chervonogo zabarvlennya z dobre vidimoyu strukturoyu hromatinu dobre vidilyayutsya yadercya granulomeri trombocitiv farbuyutsya v chervonij kolir todi yak gialomeri u blakitnij gemoglobin zabarvlyuyetsya rozhevo Rezultat farbuvannya hromosomHromosomi zabarvlyuyutsya rivnomirno farbnikom Yaksho buv vpliv na hromosomi tripsinom to voni demonstruyut dilyanki riznogo koloru hromosomni smugi PrimitkiGiemsa G Eine Vereinfachung und Vervollkommnung meiner Methylenazur Methylenblau Eosin Farbemethode zur Erzielung der Romanowsky Nochtschen Chromatinfarbung Centralbl f Bakt etc magazin 1904 Bd 37 S 308 311 nim DzherelaB Fleischer 100 years ago Giemsa s solution for staining of plasmodia Trop Med Int Health 9 2004 755 756 angl K 120 j godovshine otkrytiya effekta Romanovskogo Okraska po Romanovskomu k voprosu o prioritete A V Bezrukov OOO EMKO 2010 1 27 listopada 2021 u Wayback Machine ros PosilannyaGiemsa Farbung 12 chervnya 2018 u Wayback Machine nim Vikishovishe maye multimedijni dani za temoyu Farbuvannya za Romanovskim Gimzoyu