Azərbaycanca
Беларускі
Dansk
Deutsch
Española
Français
Indonesia
Italiana
日本語
Қазақ
Lietuvos
Nederlands
Português
Русский
සිංහල
แบบไทย
Türkçe
Українська
中國人
United State
Afrikaans
Фрагмент Кленова – білок, штучний ензим, який був отриманий контрольованим протеолітичним розщепленням ДНК-полімерази I, виділеної з E. coli за допомогою протеази субтілізину. Вперше отриманий в 1970 році, фрагмент Кленова зберігає 5' → 3'-полімеразну та 3’ → 5’-екзонуклеазну вихідної полімерази, тоді як 5' → 3'-екзонуклеазна активність відсутня.
Застосування
Оскільки 5' → 3'-екзонуклеазна активність ДНК-полімерази I з E. coli робить її малопридатною для багатьох застосувань, фрагмент Кленова, позбавлений цього недоліку, знайшов широке коло застосувань в молекулярній біології, а саме:
- синтез дволанцюгової ДНК у пробірці із використанням одноланцюгової ДНК як матриці
- Нарощення 3'-вкорочених кінців, щоб затупити липкі кінці з 5'-виступаючим фрагментом
- Видалення 3'-виступаючих кінців
- Приготування радіоактивних ДНК-зондів
Фрагмент Кленова використовувався також в найпершому оригінальному варіанті полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР), допоки не був замінений термостабільними аналогами, такими як Taq-полімераза.
exo- фрагмент Кленова
Якщо 3' → 5'-екзонуклеазна активність фрагмента Кленова є небажаною, її можна позбутись точковим мутагенезом. Ензим, що утворюється в результаті, має лише 5' → 3'-полімеразну активність, без будь-якої екзонуклеазної (5' → 3' і 3' → 5'). Він отримав назву exo- фрагмент Кленова.
exo- фрагмент Кленова використовується в деяких реакціях флуоресцентного мічення для ДНК-мікромасивів.
Див. також
Посилання
- Klenow H and Henningsen I (1970). Selective Elimination of the Exonuclease Activity of the Deoxyribonucleic Acid Polymerase from Escherichia coli B by Limited Proteolysis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Т. 65, № 1. с. 168—175. doi:10.1073/pnas.65.1.168. PMC 286206. PMID 4905667.
- Saiki RK та ін. (1985). Enzymatic Amplification of β-globin Genomic Sequences and Restriction Site Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia. Science. Т. 230. с. 1350—54. doi:10.1126/science.2999980. PMID 2999980.
- Saiki та ін. (1988). Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase. Science. Т. 239. с. 487—91. doi:10.1126/science.2448875. PMID 2448875.
Вікіпедія, Українська, Україна, книга, книги, бібліотека, стаття, читати, завантажити, безкоштовно, безкоштовно завантажити, mp3, відео, mp4, 3gp, jpg, jpeg, gif, png, малюнок, музика, пісня, фільм, книга, гра, ігри, мобільний, телефон, android, ios, apple, мобільний телефон, samsung, iphone, xiomi, xiaomi, redmi, honor, oppo, nokia, sonya, mi, ПК, web, Інтернет
Fragment Klenova bilok shtuchnij enzim yakij buv otrimanij kontrolovanim proteolitichnim rozsheplennyam DNK polimerazi I vidilenoyi z E coli za dopomogoyu proteazi subtilizinu Vpershe otrimanij v 1970 roci fragment Klenova zberigaye 5 3 polimeraznu ta 3 5 ekzonukleaznu vihidnoyi polimerazi todi yak 5 3 ekzonukleazna aktivnist vidsutnya Funkcionalni domeni fragmenta Klenova zliva ta DNK polimerazi I zprava ZastosuvannyaOskilki 5 3 ekzonukleazna aktivnist DNK polimerazi I z E coli robit yiyi malopridatnoyu dlya bagatoh zastosuvan fragment Klenova pozbavlenij cogo nedoliku znajshov shiroke kolo zastosuvan v molekulyarnij biologiyi a same sintez dvolancyugovoyi DNK u probirci iz vikoristannyam odnolancyugovoyi DNK yak matrici Naroshennya 3 vkorochenih kinciv shob zatupiti lipki kinci z 5 vistupayuchim fragmentom Vidalennya 3 vistupayuchih kinciv Prigotuvannya radioaktivnih DNK zondiv Fragment Klenova vikoristovuvavsya takozh v najpershomu originalnomu varianti polimeraznoyi lancyugovoyi reakciyi PLR dopoki ne buv zaminenij termostabilnimi analogami takimi yak Taq polimeraza exo fragment KlenovaYaksho 3 5 ekzonukleazna aktivnist fragmenta Klenova ye nebazhanoyu yiyi mozhna pozbutis tochkovim mutagenezom Enzim sho utvoryuyetsya v rezultati maye lishe 5 3 polimeraznu aktivnist bez bud yakoyi ekzonukleaznoyi 5 3 i 3 5 Vin otrimav nazvu exo fragment Klenova exo fragment Klenova vikoristovuyetsya v deyakih reakciyah fluorescentnogo michennya dlya DNK mikromasiviv Div takozhDNK polimeraza IPosilannyaKlenow H and Henningsen I 1970 Selective Elimination of the Exonuclease Activity of the Deoxyribonucleic Acid Polymerase from Escherichia coli B by Limited Proteolysis Proc Natl Acad Sci USA T 65 1 s 168 175 doi 10 1073 pnas 65 1 168 PMC 286206 PMID 4905667 Saiki RK ta in 1985 Enzymatic Amplification of b globin Genomic Sequences and Restriction Site Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia Science T 230 s 1350 54 doi 10 1126 science 2999980 PMID 2999980 Saiki ta in 1988 Primer directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase Science T 239 s 487 91 doi 10 1126 science 2448875 PMID 2448875